थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी | TLC in Hindi

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Thin layer chromatography definition

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी एक ऐसी तकनीक है जिसका उपयोग non- volatile मिश्रणों को अलग करने के लिए किया जाता है। इसका प्रयोग एल्यूमीनियम पन्नी, प्लास्टिक, या कांच की एक शीट पर किया जाता है, जो सोखने वाली सामग्री की एक thin layer के साथ coated होता है। Generally इस्तेमाल की जाने वाली सामग्री एल्यूमीनियम ऑक्साइड, सेल्युलोज या सिलिका जेल है। पृथक्करण के पूरा होने पर, प्रत्येक component लंबवत रूप से अलग किए गए spots के रूप में appear होता है। Thin layer chromatography (TLC) अमीनो एसिड के मिश्रण को अलग कर सकती है और उनके आरएफ मूल्यों को मापकर परीक्षण अमीनो एसिड की पहचान कर सकती है। TLC व्यापक रूप से प्रयोग की जाने वाली laboratory तकनीक है और यह पेपर क्रोमैटोग्राफी के समान है। हालांकि, कागज के एक stationary phase का उपयोग करने के बजाय, इसमें एल्यूमिना, सिलिका जेल या सेल्युलोज जैसे सोखने वाले की एक पतली परत का एक stationary phase शामिल होता है। पेपर क्रोमैटोग्राफी की तुलना में, इसमें तेज प्रतिक्रिया, better separation का लाभ है।

Thin layer chromatography principle-

अन्य क्रोमैटोग्राफिक techniques की तरह, थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी (TLC) separation principle पर निर्भर करती है। separation दोनों phases के लिए यौगिकों की relative affinity पर निर्भर करता है। Mobile phase में यौगिक stationary phase की surface पर चलते हैं। movement इस तरह से होता है कि stationary phase के लिए higher affinity वाले यौगिक धीरे-धीरे चलते हैं जबकि अन्य यौगिक तेजी से travel करते हैं। इसलिए, मिश्रण का separation प्राप्त होता है। Separation process के पूरा होने पर, मिश्रण से अलग-अलग component प्लेटों पर संबंधित स्तरों पर spots के रूप में दिखाई देते हैं। उनके character and nature की पहचान उपयुक्त पहचान तकनीकों द्वारा की जाती है।अंत में इस तकनीक का उपयोग यौगिक की शुद्धता, प्रतिक्रिया की प्रगति और मिश्रण में मौजूद विभिन्न यौगिकों की पहचान करने के लिए किया जाता है।

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी में stationary phase कांच/धातु प्लेट, प्लास्टिक शीट आदि के ऊपर सिलिका जेल, एल्यूमिना और सेल्यूलोज आदि है।

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी में mobile phase विलायक/सॉल्वैंट्स के मिश्रण develop कर रहा है |

Thin Layer Chromatography Procedure-

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी प्लेट्स – रेडीमेड प्लेटों का उपयोग किया जाता है जो रासायनिक रूप से निष्क्रिय और स्थिर होती हैं। Stationary phase (सिलिका जेल, एल्यूमिना और सेल्युलोज) को इसकी सतह पर एक thin layer के रूप में लगाया जाता है। प्लेट पर stationary phase में एक fine particles आकार होता है और यह एक समान मोटाई का भी होता है।

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी चैंबर – प्लेट develop करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला चैंबर। यह एक स्थिर वातावरण के लिए जिम्मेदार है जिसके अंदर धब्बे विकसित होने में मदद मिलेगी। साथ ही, यह sovent के वाष्पीकरण को रोकता है और पूरी प्रक्रिया को धूल मुक्त रखता है।

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी mobile phase – Mobile phase वह है जो moves करता है और इसमें solvents मिश्रण या solvent होता है। यह phase particulate free होना चाहिए। शुद्धता की गुणवत्ता जितनी अधिक होगी, spots का develop उतना ही बेहतर होगा।

Thin layer chromatography Filter paper – इसे चेंबर के अंदर रखना होता है। इसे Mobile phase में moistened किया जाता है।

Thin layer chromatography diagram-

Thin layer chromatography का diagram चित्र में दिखाया गया है-

Thin Layer Chromatography Experiment-

सैंपल स्पॉट को चिह्नित करने के लिए पेंसिल की मदद से प्लेट के निचले भाग पर पतले निशान बनाए जाते हैं। sample युक्त solution का एक छोटा सा spot प्लेट पर लगाया जाता है, TLC प्लेट को chamber में रखा जाता है जहां Sample spots chamber में solvent की सतह को नहीं छूते हैं, और ढक्कन बंद हो जाता है। Solvent capillary action द्वारा प्लेट को ऊपर ले जाता है, sample mixture से मिलता है और इसे प्लेट में ले जाता है। सॉल्वेंट फ्रंट stationary phase के शीर्ष तक पहुंचने से पहले प्लेट को कक्ष से हटा दिया जाना चाहिए और फिर प्लेट को सुखाया जाता है। Sample spot Ultra violet chamber के माध्यम से पता लगाया जा सकता है फिर visible color के अनुसार Retention Factor आरएफ की गणना की जा सकती है। इस विधि द्वारा color samples और without color के sample का पता लगाया जा सकता है।

यूवी (UV)विज़ुअलाइज़ेशन, एसिड उपचार, आयोडीन वाष्प उपचार, वैलिनिन दाग और निनहाइड्रिन उपचार।

इस विधि में अल्ट्रा वायलेट विज़ुअलाइज़ेशन में पता चला कि यौगिक अल्ट्रा वायलेट किरणों के सामने फ्लोरोसेंट उत्पन्न करते हैं उदाहरण पॉलीफेनोल।
एसिड ट्रीटमेंट में, प्लेट को एसिड में डिप करके अलग किया जाता है, फिर हवा में सुखाया जाता है और इसके बाद प्लेट को गर्म करके प्लेट पर ब्राउन स्पॉट उत्पन्न करते हैं।
आयोडीन वाष्प उपचार उस घटक का इलाज करता है जिसमें डबल कार्बन यौगिक बंधन मौजूद होता है।
वैलिनिन दाग अल्कोहल, एल्डिहाइड और कीटोन के रूप में व्यवहार करता है।
निनहाइड्रिन उपचार, यदि Samples में अमीनो एसिड होता है तो इस उपचार का उपयोग किया जाता है।

Application of thin layer chromatography-

विभिन्न दवाओं जैसे sedatives, local anesthetics, anticonvulsant tranquilizers, analgesics, antihistamines, steroids, hypnotics का गुणात्मक परीक्षण TLC द्वारा किया जाता है।
TLC जैव रासायनिक analysis में अत्यंत उपयोगी है जैसे कि इसके रक्त प्लाज्मा, मूत्र, शरीर के तरल पदार्थ, सीरम, आदि से जैव रासायनिक मेटाबोलाइट्स को अलग करना ।
थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी का उपयोग प्राकृतिक उत्पादों जैसे आवश्यक तेल या वाष्पशील तेल, स्थिर तेल, ग्लाइकोसाइड, मोम, एल्कलॉइड आदि की पहचान के लिए किया जा सकता है।
Multicomponent Pharmaceutical Formulation को अलग करने में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
इसका उपयोग samples की शुद्धि के लिए किया जाता है और samples और authentic samples के बीच सीधी तुलना की जाती है।
इसका उपयोग खाद्य उद्योग में रंगों, मीठा करने वाले एजेंट और परिरक्षकों को अलग करने और पहचानने के लिए किया जाता है
इसका उपयोग कॉस्मेटिक उद्योग में किया जाता है।

Advantage of thin layer chromatography-

TLC के various location को बिना किसी समस्या के देखा जा सकता है।
अन्य विधियों की तुलना में यह क्रोमैटोग्राफी process cost प्रभावी है।
इसका उपयोग कई यौगिकों के लिए किया जा सकता है, और इसमें अधिक समय नहीं लगता है
process अन्य विधियों की तुलना में बहुत straightforward है।
TLC किसी भी यौगिक के शुद्धता मानकों का विश्लेषण करना आसान बनाता है।
कई यौगिकों को TLC के माध्यम से आसानी से पृथक किया जा सकता है।

Disadvantage of thin layer chromatography-

थिन लेयर क्रोमैटोग्राफी प्लेटों में लंबे समय तक stationary phase नहीं होता है।
जब अन्य क्रोमैटोग्राफिक तकनीकों की तुलना में पृथक्करण की लंबाई सीमित होती है।
TLC से उत्पन्न परिणाम reproduce करना मुश्किल है।
चूंकि TLC एक open system के रूप में कार्य करता है, कुछ कारक जैसे आर्द्रता और तापमान क्रोमैटोग्राम के अंतिम परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं।
Detection limit high है और इसलिए यदि low detection limit लगाना चाहते हैं, तो TLC का उपयोग नहीं कर सकते।
यह केवल qualitative विश्लेषण तकनीक है न कि quantative।

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